Penanaman dan Isolasi Mikroorganisme

Penanaman dan Isolasi Mikroorganisme 1. Menyiapkan ruangan Bersih, bebas angin, meja didasari kain basah 2. Pemindahan dengan kawat inokulasi Ujung kawat ose dipijarkan, mulut tabung tempat pemeliharaan dipanasi setelah sumbatnya diambil, setelah pengambilan inokulum selesai - panaskan lagi mulut tabung dan sumbat 3. Pemindahan dengan pipet 1 ml diencerkan dengan 99 ml air murni yang telah disterilkan, dituang ke petri yang berisi medium agar yang masih dalam keadaan cair dan dicampuraduk sampai homogen. Setelah membeku, simpan dalam inkubator. Bakteri aerob dan anaerob dapat tumbuh 4. Teknik biakan Murni Seringkali mikroba patogen bersama-sama dengan saproba. Teknik biakan murni dapat dilakukan dengan beberapa cara: a. Cara pengenceran Caranya adalah dengan mengencerkan suspensi yang berupa campuran bermacam-macam spesies kemudian diencerkan dalam suatu tabung tersendiri. Dari pengenceran tersebut kemudian diambil 1 ml untuk diencerkan lagi. Dari pengenceran kedua diambil 1 ml untuk diencerkan lebih lanjut. Dari pengenceran ketiga diambil 0,1 ml untuk disebarkan pada suatu medium padat. Kemungkinan akan ditemukan beberapa koloni. b. Cara penuangan Mengambil sedikit sampel campuran bakteri yang sudah diencerkan dan sampel itu kemudian disebarkan dalam suatu medium dari kaldu dan gelati encer. Setelah medium mengental, maka beberapa jam kemudian nampaklah koloni yang masing-masing dapat dianggap murni. Dengan mengulang pekerjaan seperti di atas, akhirnya akan diperoleh biakan murni yang lebih terjamin c. Cara penggesekan/penggoresan Cara ini akan menghasilkan koloni yang terpisah. Ada beberapa teknik penggesekan, yaitu: a. Goresan T - Lempengan dibagi menjadi tiga bagian dengan huruf T pada bagian luar dasar cawan petri. - Inokulasikan daerah 1 sebanyk mungkin dengan gerakan sinambung - Panaskan ose dan biarkan dingin kembali - Gores ulang daerah 1 sebanyak 3-4 kali dan teruskan goresan ke daerah 2 - Pijarkan kembali ose dan dinginkan kembali - Prosedur di atas diulangi untuk daerah 3 b. Goresan kuadran, teknik ini sama dengan goresan T, hanya lempengan agar dibagi menjadi 4 c. Goresan Radian - Goresan dimulai dari bagian pinggir lempengan - Pijarkan sengkelit dan dinginkan kembali - Putar lempengan agar 90 derajat dan buat goresan terputus di atas goresan sebelumnya - Pijarkan Ose d. Goresan sinambung - Ambil satu mata ose suspensi dan goreskan setengah permukaan lempengan agar - Jangan pijarkan ose, putar lempengan 180 derajat, gunakan sisi mata ose yang sama dan gores pada sisa permukaan lempengan agar METODE HITUNGAN CAWAN a. Metode Tuang (Pour Plate) Dari pengenceran, sebanyak 1 ml/0,1 ml larutan tersebut dipipet ke dalam cawan petri menggunakan pipet 1 ml/0,1 ml. Waktu pengenceran sampai dengan waktu tuang tidak boleh lebih lama dari 30 menit. Kemudian masukkan agar cair steril yang telah didinginkan sampai 47-50 derajat celcius sebanyak 15-20 ml. Jangan biarkan terbuka lebar. Gerakkan petri untuk menyebarkan sel-sel secara merata. Setelah agar memadat diinkubasi di dalam inkubator dalam posisi terbalik b. Metoda Permukaan (Surface /Spread Plate) Pada pemupukan dengan metode permukaan, agar steril terlebih dahulu dituangkan ke dalam cawan petri dan dibiarkan membeku. Setelah membeku dengan sempurna, kemudian sebanyak 0,1 ml contoh yang telah diencerkan dipipet pada permukaan agar tersebut. Sebuah batang gelas melengkung (Hockey stick) dicelupkan ke dalam alkohol 95% dan dipijarkan sehingga alkohol habis terbakar. Setelah dingin batang gela tersebut digunakan untuk meratakan contoh di atas medium agar dengan cara memutarkan cawan petri di atas meja. Selanjutnya inkubasi dan perhitungan koloni dilakukan seperti pada metode penuangan. Tetapi harus diingat bahwa jumlah contoh yang ditumbuhkan adalah 0,1 ml, jad harus dimasukkan dalam perhitugan "total count". Kebanyakan mikroba dapat menggunakan karbohidrat sebagai sumber energi. Hasil pemecahan: asam-asam organic (asam laktat, asetat, butirat atau propionat), Produk-produk netral (aseton, butyl alkohol, etil alkohol) dan bermacam-macam gas (metana, hidrogen, CO2).